Изучение эффективности связывания обогащенной 2'-F-модифицированной РНК-библиотеки с поликлональными аутоантителами

Таблица 5. Kd комплексов аутоантител с исходной 2'-F-модифицированной РНК-библиотекой, библиотекой после 6-го и после 10-го раундов SELEX

На основе приведенных в табл. 5 значений Kd можно сделать вывод, что данная методика отбора 2'-F-модифицированных РНК-аптамеров позволяет обогащать комбинаторную 2'-F-модифицированную РНК-библиотеку последовательностями, обладающими сродством к аутоантителам человека, больного рассеянным склерозом.

Было исследовано влияние 2'-F-модифицированной РНК-библиотеки после 10-го раунда SELEX на реакцию деградации ОБМ аутоантителами, вырабатываемыми организмом человека при рассеянном склерозе (рис. 15).

Рис. 15. Влияние 2'-F-модифицированной РНК-библиотеки после 10-го раунда SELEX на протеолитическую активность аутоантител. Каждая реакционная смесь (12 мкл) содержала 6 мкг ОБМ, 6 мкг аутоантител, 17 мМ Трис-HCl (pH 7.5), 17 мМ NaCl. Концентрация 2'-F-РНК библиотеки составляла 0 мкМ, 0.1 мкМ, 0.3 мкМ, 0.5 мкМ, 1 мкМ, 3 мкМ, 5 мкМ и 7 мкМ. Реакцию деградации ОБМ проводили при 30°С в течение 24 ч. Реакционные смеси анализировали гель-электрофорезом в 12%-ном ПААГ с последующим окрашиванием Coomassie Blue R-250. Данные получены в ЛФР ИХБФМ СО РАН Безугловой А.М.

На основании полученных данных можно сделать предварительный вывод, что 2'-F-модифицированная РНК-библиотека после 10-го раунда отбора содержит олигонуклеотиды, ингибирующие протеазную активность патогенных аутоантител.